高效液相色譜在材料測(cè)試中的定性定量方法有(高效液相色譜在材料測(cè)試中的定性定量方法有哪些)

高效液相色譜法是利用高壓輸液泵將規(guī)定的流動(dòng)相泵入裝有填料的色譜柱中，對(duì)測(cè)試樣品進(jìn)行分離和測(cè)定的色譜方法。注入的測(cè)試樣品由流動(dòng)相帶入色譜柱。各組分在色譜柱中分離并進(jìn)入檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)。色譜信號(hào)由積分器或數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)記錄和處理。

高效液相色譜法有以下方法：

1.定性分析

常用的定性方法主要包括但不限于利用保留時(shí)間定性、利用光譜相似性定性、利用質(zhì)譜檢測(cè)器提供的質(zhì)譜信息定性。

利用保留時(shí)間定性

保留時(shí)間（tR）定義為組分進(jìn)樣到柱后出現(xiàn)該組分最大響應(yīng)值的時(shí)間，即從進(jìn)樣到某一組分色譜峰出現(xiàn)峰所需的時(shí)間。時(shí)間通常以分鐘(min)為單位來衡量，用于反映分離組分的性質(zhì)差異。通常以相同色譜條件下待測(cè)組分與對(duì)照品的保留時(shí)間是否一致作為待測(cè)組分定性測(cè)定的依據(jù)。

在相同色譜條件下，待測(cè)組分的保留時(shí)間與對(duì)照品的保留時(shí)間不應(yīng)有顯著差異；保留時(shí)間不同的兩個(gè)色譜峰屬于不同的化合物，但保留時(shí)間相同的兩個(gè)色譜峰可能并不總是可識(shí)別的。屬于同一化合物，鑒定未知物質(zhì)時(shí)應(yīng)特別注意。

若改變流動(dòng)相組成或更換色譜柱類型，待測(cè)組分的保留時(shí)間仍與對(duì)照品一致，可進(jìn)一步證實(shí)待測(cè)組分與對(duì)照品的保留時(shí)間一致。物質(zhì)是同一種化合物。

當(dāng)待測(cè)成分沒有對(duì)照品（保留時(shí)間tR，1）時(shí)，可將樣品中的另一種成分或另一種已知成分添加到樣品中作為對(duì)照品（保留時(shí)間tR，2），保留時(shí)間（RRT）作為定性（或定位）方法。種類下，除非另有說明，相對(duì)保留時(shí)間通常是指待測(cè)組分的保留時(shí)間相對(duì)于主成分的保留時(shí)間的比值，按下式計(jì)算，作為未調(diào)整的保留時(shí)間，不扣除死區(qū)時(shí)間。

如果需要計(jì)算調(diào)整后的保留時(shí)間減去死區(qū)時(shí)間，應(yīng)在相應(yīng)品種下注明。

利用光譜相似性進(jìn)行定性

化合物的全波長(zhǎng)掃描紫外-可見區(qū)域光譜提供了一些有價(jià)值的定性信息。待測(cè)成分的光譜與對(duì)照品光譜的相似度可用于輔助定性分析。當(dāng)二極管陣列檢測(cè)器開啟一定波長(zhǎng)范圍內(nèi)的掃描功能時(shí)，可以獲得更多的信息，包括色譜信號(hào)、時(shí)間、波長(zhǎng)的三維色譜圖，可用于輔助定性分析和峰純度分析。

還應(yīng)該注意的是，具有不同光譜的兩個(gè)色譜峰代表不同的化合物，但具有相似光譜的兩個(gè)色譜峰不一定歸因于同一化合物。

利用質(zhì)譜檢測(cè)器提供的質(zhì)譜信息來定性

利用質(zhì)譜檢測(cè)器提供的色譜峰的分子質(zhì)量和結(jié)構(gòu)信息進(jìn)行定性分析，比僅僅利用保留時(shí)間或增加光譜相似度進(jìn)行定性分析，可以獲得更多、更可靠的信息。它不僅可以用于已知物質(zhì)的定性分析。還可以提供未知化合物的結(jié)構(gòu)信息。

2.定量分析

內(nèi)標(biāo)法

按照產(chǎn)品正文的規(guī)定，精密稱取（量?。?duì)照品和內(nèi)標(biāo)物，分別配制溶液。準(zhǔn)確稱取每種物質(zhì)適量，混合制成對(duì)照溶液，用于測(cè)定校準(zhǔn)因子。注入一定量的樣品，記錄色譜圖。測(cè)定對(duì)照品和內(nèi)標(biāo)物的峰面積或峰高，按下式計(jì)算校正系數(shù)：

然后取各品種下含內(nèi)標(biāo)物的供試品溶液，注入樣品，記錄色譜圖，測(cè)定供試品中待測(cè)成分與內(nèi)標(biāo)物的峰面積或峰高，根據(jù)為以下公式：

采用內(nèi)標(biāo)法可以避免樣品前處理和進(jìn)樣量誤差對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響。

外標(biāo)法

按各品種規(guī)定，精密稱取對(duì)照品和供試品，制成溶液，各精密量取，進(jìn)樣，記錄色譜，測(cè)定對(duì)照品的含量溶液和待測(cè)物質(zhì)溶液。對(duì)于某種物質(zhì)的峰面積（或峰高），按以下公式計(jì)算含量：

式中符號(hào)含義同上。

采用外標(biāo)法測(cè)定時(shí)，宜采用手動(dòng)進(jìn)樣器定量環(huán)或自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣。

帶校正因子的主成分自對(duì)比法

測(cè)量雜質(zhì)含量時(shí)，可采用帶有校正因子的主成分自控法。建立方法時(shí)，按各品種規(guī)定，精密稱取（量?。┕┰嚻泛蛯?duì)照品對(duì)照品適量，配制供試品雜質(zhì)校正因子溶液，注入樣品。記錄色譜圖，然后按下列公式計(jì)算待測(cè)雜質(zhì)的校正因子。

還可以準(zhǔn)確稱取主成分對(duì)照品和雜質(zhì)對(duì)照品適量，配制成不同濃度的溶液，進(jìn)樣，記錄色譜圖，繪制主成分濃度與雜質(zhì)濃度的回歸曲線其峰面積，從而將校正因子計(jì)算為主成分回歸線的斜率與雜質(zhì)回歸線的斜率之比。

校正因子可以直接加載到每個(gè)產(chǎn)品項(xiàng)中，用于校正所測(cè)得的雜質(zhì)峰面積。對(duì)于需要校準(zhǔn)和計(jì)算的雜質(zhì)，通常以主成分為參考，采用相對(duì)保留時(shí)間定位，并將其值加載到每個(gè)產(chǎn)品項(xiàng)中。向下。

測(cè)定雜質(zhì)含量時(shí)，按各品種規(guī)定的雜質(zhì)限量，將供試品溶液稀釋成與雜質(zhì)限量相當(dāng)?shù)娜芤鹤鳛閷?duì)照溶液，進(jìn)樣，記錄色譜圖，調(diào)整縱坐標(biāo)范圍（至噪聲）如果需要的話。可接受水平為限度），使對(duì)照溶液主成分色譜峰的峰高達(dá)到滿量程的10%25%左右。除另有規(guī)定外，含量小于0.5%的雜質(zhì)，峰面積測(cè)定值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）應(yīng)小于10%；對(duì)于含量為0.5%2%的雜質(zhì)，峰面積測(cè)定值的RSD應(yīng)小于5%；對(duì)于含量大于2%的雜質(zhì)，峰面積測(cè)定值的RSD應(yīng)小于2%。然后，取供試品溶液和對(duì)照溶液適量，分別注入。除另有規(guī)定外，供試品溶液的記錄時(shí)間應(yīng)為主成分色譜峰保留時(shí)間的2倍。應(yīng)測(cè)定供試品溶液色譜上各雜質(zhì)的峰面積，乘以相應(yīng)的校正因子，與對(duì)照品比較。比較溶液主要成分的峰面積，計(jì)算出各雜質(zhì)的含量。

無校正因子主成分自對(duì)比法

測(cè)量雜質(zhì)含量時(shí)，如果無法獲得待測(cè)雜質(zhì)的校正因子，或者可以忽略校正因子，也可以采用不加校正因子的主成分自控法。按上述(3)制備對(duì)照溶液，進(jìn)樣，調(diào)整縱坐標(biāo)范圍，計(jì)算峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，取供試品溶液和對(duì)照品溶液各適量，分別注入樣品。除另有規(guī)定外，供試品溶液的記錄時(shí)間應(yīng)為主成分色譜峰保留時(shí)間的2倍。應(yīng)測(cè)定供試品溶液色譜圖中各雜質(zhì)的峰面積，并與對(duì)照溶液主要成分的峰面積進(jìn)行比較。依法計(jì)算雜質(zhì)含量。

面積歸一化法

按各產(chǎn)品規(guī)定，配制供試品溶液，進(jìn)樣一定量，記錄色譜圖。測(cè)定色譜圖上除溶劑峰外的各峰面積和總色譜峰面積，并計(jì)算各峰面積占總峰面積的百分比。用于雜質(zhì)檢驗(yàn)時(shí)，由于儀器響應(yīng)的線性限制，峰面積歸一化法一般不適用于痕量雜質(zhì)的檢驗(yàn)。測(cè)試狗